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StarLighter Probe qPCR Mix (Universal)

產品簡述：

StarLighter Probe qPCR Mix (Universal) 是一款基于探針法對各種來源的DNA樣本進行快速定量、實時分析的通用試劑盒。性能優異的熱啟動基因工程改造Taq DNA polymerase，配合基于探針法qPCR優化的緩沖液，可以有效抑制非特異性擴增，大大增加qPCR擴增效率，適用于進行高靈敏度的qPCR反應。參比染料ROX隨試劑盒提供。

本產品使用前只需要加入引物、模板、探針、ROX（根據使用的機型而定）和水。定量范圍寬，可以對靶基因進行準確的定量、定性和SNP檢測；本產品具有重復性好，可信度高，并兼容各種不同類型的qPCR探針的特點。

產品優勢:                        

l 擴增特異性強，數據結果可靠；   

l 高GC模板擴增能力強；

l 擴增效率高，Ct值提前 ；            

l 信噪比高，低copy檢測靈敏度高。    

產品應用：

l 基因表達分析；

l SNP和等位基因分型；

l 測序和微陣列結果的驗證。

產品性能比較：

利用ARMS-qPCR技術對ApoE兩個基因亞型ApoE2、ApoE3進行分型：以攜帶ApoE3基因亞型的人類基因組為模板，設計兩對亞型特異性引物（對應亞型可以擴增，非對應亞型不能擴增。與某競品平行測試。

ACTB：內參基因；ApoE: 待測基因（片段長度197bp，GC含量71%）

 1、擴增特異性強，數據結果可靠

Fig1：使用StarLighter Probe qPCR Mix(Universal)試劑，利用攜帶ApoE3基因亞型的人類基因組為模板，AopE2沒有擴增，AopE3擴增良好，說明StarLighter Probe qPCR Mix(Universal)目的產物擴增特異性好; 競品未能擴增出高GC片段。

 2. 高GC模板擴增能力強

Table1：使用StarLighter Probe qPCR Mix(Universal)試劑，利用攜帶ApoE3基因亞型的人類基因組為模板，和競品ct值比較

Fig2：以人基因組為模板，模板濃度分別為50ng、5ng、0.5ng、0.05ng，擴增ApoE3基因，擴增片段長度197bp，GC含量71%。使用StarLighter Probe qPCR Mix(Universal)試劑可得到有效擴增，而競品沒有擴增出ApoE3（Ct>45）。

 3. 普通GC含量模板擴增效率高，梯度稀釋線型范圍好

a、StarLighter Probe qPCR Mix(Universal)與競品擴增內參基因ACTB比較                            

Fig3：以人基因組為模板，模板濃度分別為50ng、 5ng、0.5ng、0.05ng，擴增內參基因ACTB基因，擴增片段長度179bp，使用StarLighter Probe qPCR Mix(Universal)可有效擴增ACTB基因，擴增效率和R²值均優于競品。CT值比競品提前約1-1.5個cycle。

 4、低拷貝模板檢測靈敏度高

Fig4：以人類基因組為模板，模板起始濃度為100ng，將模板進行5倍梯度稀釋，使用StarLighter Probe qPCR Mix (Universal)試劑。當模板濃度低至0.032ng時，內參基因ACTB和目的基因ApoE3仍能得到有效擴增，且起始模板量的log值和其Ct值線性關系良好。

 5、高穩定性

Fig5：不同凍融次數對StarLighter Probe qPCR Mix (Universal)試劑的穩定性影響，加入不同起始量模板情況下，不同凍融次數的擴增曲線重復性良好。

Fig6 : 37℃處理5天對StarLighter Probe qPCR Mix (Universal)試劑的穩定性影響。加入不同起始量模板情況下，37℃儲存5天試劑的擴增曲線與未經37℃處理的試劑的擴增曲線重復性良好。

Fig7 : 室溫處理28天對StarLighter Probe qPCR Mix (Universal)試劑的穩定性影響。加入不同起始量模板情況下，室溫處理28天試劑的擴增曲線與未經室溫處理的試劑的擴增曲線重復性良好。（本實驗在Q6上完成）

Fig8 : 4℃處理43天對StarLighter Probe qPCR Mix (Universal)試劑的穩定性影響。加入不同起始量模板情況下，4℃處理43天試劑的擴增曲線與未經 4℃處理的試劑的擴增曲線重復性良好。（本實驗在Q6上完成）

產品在人類基因分型中的應用實例：

實例一

以已知分型的不同個體人類血液提取的基因組為模板，設計ApoE基因亞型特異性引物，使用StarLighterProbe qPCR Mix(Universal)，通過qPCR擴增對不同個體攜帶的ApoE基因進行分型，得到的分型結果與已知分型情況一致。

Table2：不同個體人類基因組ApoE分型

 實例二

G719S(18外顯子)、T790M（外顯子）是位于表皮生長因子受體(EGFR)基因不同外顯子上的突變點，這些突變與肺癌，宮頸癌等癌癥的靶向用藥有關。G719S(18外顯子)、T790M（外顯子）兩個突變的篩查可用于指導不同靶向藥物的使用。

通過將待檢測突變位點設計在探針中間，以人類基因組為模板，通過qPCR基因分型結果可以判斷是否攜帶該突變。

Fig9：使用StarLighter Probe qPCR Mix（Universal）和競品進行基因分型，結果一致

說明書附件下載：

StarLighter Probe qPCR  Mix(Universal)說明書V1.pdf